目录

 

摘要 2

Abstract 4

目录 6

第一章   绪论 10

1. 1 蜘蛛香及其有效成分的研究概述 10

1.1.1 蜘蛛香及蜘蛛香素E简介 10

1.1.2 蜘蛛香抗焦虑的研究概述 10

1.2 谷氨酸受体在焦虑症中的研究现状 11

1.3 钙离子在中枢神经系统中作用与意义 14

1.4 基于钙流的 GPCR 高通量药物筛选 15

1.5 本课题的背景 16

1.6 本课题的创新性与意义 16

第二章  Vero-Ga15-mGluR2和Vero-Ga15-mGluR3转染细胞的构建 16

2.1 实验材料 16

2.1.1 细胞株 16

2.1.2 主要样品和试剂 17

2.1.3 主要仪器及设备 17

2.2 实验方法 17

2.2.1 mGluR2和mGluR3、GNA15真核表达载体的构建 18

2.2.2 质粒制备 21

2.2.3 细胞转染 21

2.2.4 Real-Time PCR验证细胞株目的基因GNA15、mGluR2和mGluR3的表达 23

2.3 实验结果 26

2.3.1 真核表达载体的构建时PCR扩增结果 26

2.3.2 GNA15、mGluR2、mGluR3菌液PCR结果 26

2.3.3 序列测定与结果 27

2.3.4 质粒提取结果 27

2.3.5 转染细胞的筛选结果 27

2.3.6 RNA浓度及纯度以及RNA电泳图结果 27

2.3.7 目的基因GNA15、mGluR2和mGluR3的表达结果 28

2.4 讨论与小结 29

第三章  蜘蛛香环烯醚萜类成分对mGluR2和mGluR3的激动作用 29

3.1 实验材料 29

3.1.1 细胞株 30

3.1.2 实验药物 30

3.1.3 主要试剂 30

3.1.4 主要仪器 30

3.2 实验步骤 31

3.2.1 细胞培养的准备 31

3.2.2 细胞培养 31

3.2.3 CCK-8法检测TIV和蜘蛛香素E对Vero-Ga15 mGluR2和Vero-Ga15 mGluR3细胞存活的影响 31

3.2.4 TIV和蜘蛛香素E对Vero-Ga15 mGluR2细胞内Ga2+的影响 32

3.2.5 TIV和蜘蛛香素E对Vero-Ga15 mGluR3细胞内Ga2+的影响 32

3.3 数据统计 33

3.4 实验结果 33

3.4.1 TIV和蜘蛛香素E对Vero-Ga15-mGluR2细胞存活的影响 33

3.4.2 TIV和蜘蛛香素E对Vero-Ga15-mGluR3细胞存活的影响 34

3.4.3 TIV对Vero-Ga15-mGluR2细胞内Ga2+的影响 35

3.4.4 蜘蛛香素E对Vero-Ga15-mGluR2细胞内Ga2+的影响 35

3.4.5 TIV对Vero-Ga15-mGluR3细胞内Ga2+的影响 36

3.4.6 蜘蛛香素E对Vero-Ga15-mGluR3细胞内Ga2+的影响 36

3.5 讨论与小结 37

第四章  蜘蛛香环烯醚萜类成分对大鼠大脑皮质突触体内Ga2+浓度的影响 38

4.1 实验材料 38

4.1.1 实验动物 38

4.1.2 实验药物 39

4.1.3 主要试剂 39

4.1.4 主要仪器 39

4.2 实验方法 39

4.2.1 突触体的制备与鉴定 39

4.2.2 TIV对大鼠大脑皮质突触体内Ga2+的影响 41

4.2.3 蜘蛛香素E对大鼠大脑皮质突触体内Ga2+的影响 42

4.3 数据分析 42

4.4 结果与分析 42

4.4.1 透射电镜鉴定结果 42

4.4.2 大鼠大脑皮质突触体LDH活性 42

4.4.3 TIV对大鼠大脑皮质突触体内Ga2+的影响 43

4.4.4 蜘蛛香素E对大鼠大脑皮质突触体内Ga2+的影响 43

4.5 讨论与小结 44

第五章  TIV对应激焦虑大鼠的抗焦虑作用机制研究 45

5.1 实验材料 45

5.1.1 实验动物 45

5.1.2 实验药物 45

5.1.3 主要试剂 45

5.1.4 主要仪器 46

5.1.5 药液配制 46

5.1.6 Western Blot实验试剂配制 47

5.2 实验方法 48

5.2.1 实验分组、造模及给药 48

5.2.2 宏观指标的观察 48

5.2.3 大鼠敞箱实验 49

5.2.4 大鼠高架十字迷宫实验 49

5.2.5 AC活性、cAMP 含量、Glu含量检测 49

5.2.6 mGluR2、mGluR3、PKA// 蛋白表达检测 50

5.3 数据分析 52

5.4 实验结果 53

5.4.1 各组大鼠宏观表征观察 53

5.4.2 敞箱实验结果 53

5.4.3 高架十字迷宫实验结果 54

5.4.4 TIV对应激焦虑大鼠大脑皮质AC活性的影响 55

5.4.5 TIV对应激焦虑大鼠大脑皮质cAMP含量的影响 55

5.4.6 TIV对应激焦虑大鼠大脑皮质Glu含量的影响 56

5.4.7 TIV对应激焦虑大鼠大脑皮质mGluR2、mGluR3蛋白表达的影响 56

5.4.8 TIV对应激焦虑大鼠大脑皮质PKA //蛋白表达的影响 57

5.5 讨论与小结 58

结论 59

参考文献 59