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| pCold-SUMO原核克隆的构建 摘 要 目的：构建pCold-sumo原核表达载体，使目的蛋白表达量高的同时避免错误折叠过多导致包涵体生成。方法：使用限制性内切酶Nde I, Xho I将PCold-TF载体进行双酶切，得到线性化载体，再利用PCR方法扩增得到目的基因SUMO，G4S-AMH-C，然后用Overlap PCR方法制备SUMO- G4S-AMH-C融合基因，将鉴定正确、回收纯化后的目的片段及线性化载体于37℃、连接酶ExnaseⅡ作用下重组。连接产物转化 DH5α感受态细胞，挑取单菌落进行菌落PCR，接菌后提取重组质粒后测序，以IPTG为诱导剂诱导目的蛋白表达，通过SDS-RAGE凝胶电泳分析蛋白表达情况。结果：经测序结果分析显示，成功构建了PCold-SUMO原核表达载体，目的蛋白成功表达。 关键词：pcold TF ;SUMO标签;原核表达载体 。 目录 1 绪 论 1.1 表达载体..........................................................................1 1.2 SUMO标签..........................................................................1 1.3 基因的获取方式..........................................................................1 1.4 质粒的提取原理................................................................................1 1.5 DNA测序验证..........................................................................1 2 材料与方法..................................................................2 2.1 材料................................................................................2 2.2 主要仪器..........................................................................2 2.3 方法................................................................................2 3 结果与分析........................................................................................3 4 结 论....................................................................................................5 参考文献......................................................................................................6 科研情况目录..............................................................................................7 致 谢..........................................................................................................8 附 录..........................................................................................................9 |
