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| 酿酒酵母具有起始密码子表达载体pYES2-ATG的构建及应用 摘 要 在合成生物学研究中，为了对不含起始密码子的编码区片段或其随机组合体进行高通量的功能分析，有必要构建含有起始密码子的酵母表达专用载体。通过设计含有ATG和EcoRⅠ酶切位点的特异性引物扩增Intron，利用In-Fusion重组技术(Clontech)将该片段构建到酵母表达载体pYES2，得到一个含有ATG的酵母表达载体pYES2-ATG。为了检测该载体的功能，扩增不含起始密码子的DNA序列nlea，该序列由本实验室设计合成，具有潜在的耐盐功能。利用In-Fusion重组技术(Clontech)构建重组表达载体pYES2-ATG-nlea，并转化酵母。结果显示，半乳糖诱导后，含pYES2-ATG-nlea的转基因酵母菌株耐盐能力明显高于含pYES2-ATG空质粒的菌株，表明在该载体系统上的nlea成功表达，同时也证明改造的载体系统可用于没有起始密码子编码区序列的功能筛选和鉴定。pYES2-ATG酵母载体系统不影响原始载体基本功能元件的表达，同时能使不含起始密码子编码区序列在酵母中正常表达，为以后高通量地研究基因功能提供了基础。 关键词 起始密码子, In-Fusion重组技术, 酿酒酵母表达 |
