| 以下仅列出文章摘要、目录等部分内容，如需获取完整论文资料，或原创定制、长期合作，请随时联系。 微信QQ:312050216 |
 |
 |
| 沉默GRP78表达增强HOS细胞对MPPα-PDT敏感性的研究 摘要 目的：观察葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)在焦脱镁叶绿酸- α甲酯介导的光动力疗法（pyropheophorbide-α methyl ester-mediated photodynamic therapy，MPPα-PDT）处理人骨肉瘤HOS细胞中的作用，并探讨沉默GRP78表达增强HOS细胞对MPPα-PDT敏感性可能的机制。 方法：MPPα-PDT处理HOS人骨肉瘤细胞24 h后，采用Hoechst 33258凋亡试剂盒检测各组HOS细胞核形态学变化；流式细胞术检测细胞凋亡率水平；细胞免疫荧光法检测GRP78蛋白荧光强度变化；Western blot检测MPPα-PDT处理HOS细胞3、6、12和24 h后GRP78蛋白的表达水平。siRNA-GRP78成功转染HOS细胞后，分为Control组、siRNA-GRP78组、siRNA-GRP78+MPPα-PDT组及MPPα-PDT组，CCK-8法检测细胞增殖活性；Western blot检测细胞增殖蛋白(Ki67、PCNA)、凋亡相关蛋白（Cleaved-Caspase 3、Cleaved PARP）及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达；流式细胞术检测各组细胞的凋亡率水平。荧光显微镜及流式细胞术分别检测细胞活性氧（reactive oxygen species, ROS）的表达水平。 结果：MPPα-PDT 24 h组中HOS细胞核可见高亮蓝色以及核碎裂、固缩等细胞凋亡形态学变化，流式细胞术检测发现MPPα-PDT 24 h组中凋亡率明显增高。细胞免疫荧光法检测MPPα-PDT组中GRP78蛋白平均荧光强度表达增高。siRNA-GRP78可有效抑制HOS细胞的mRNA及蛋白表达；成功转染后HOS细胞后，CCK-8显示细胞增殖活性下降；流式细胞术提示凋亡水平上升；细胞增殖蛋白（PCNA、Ki67）蛋白表达水平下降（P＜0.05）；凋亡相关蛋白（Cleaved-Caspase 3、Cleaved-PARP）表达水平上调（P＜0.05）；Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达下降；流式细胞术及荧光显微镜均提示ROS水平增加。 结论：MPPα-PDT可诱导骨肉瘤HOS细胞凋亡及GRP78表达增加；siRNA-GRP78有效沉默GRP78表达后，HOS细胞增殖活性降低，凋亡水平增加，可增加HOS细胞对MPPα-PDT的敏感性，其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路激活及增加ROS相关。 关键词：葡萄糖调节蛋白78，光动力疗法，骨肉瘤，焦脱镁叶绿酸-α 甲酯，Wnt/β-catenin信号通路，活性氧 |
