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| CYP2C19基因多态性PCR扩增体系的正交优化与验证 摘要 建立SNaPshot 法检测CYP2C19*2、*3和*17基因多态性PCR反应体系和条件，筛选出4μL体系中各因素最佳水平。采用SNaPshot 技术对CYP2C19基因3个SNP位点CYP2C19*2、*3和*17同时进行PCR扩增，利用L9(34)正交实验设计，对影响PCR反应体系和条件的3个因素(PCR Mix,Taq DNA聚合酶,循环次数)在3个水平上进行优化，结果采用综合评分法和极差分析法进行分析。用3组已知样本对正交优化所得条件进行重复性和稳定性验证。结果表明CYP2C19*2、*3和*17基因PCR扩增体系的影响因素依次为：PCR Mix＞循环数＞Taq DNA聚合酶。最佳反应体系为：PCR Mix 2.0μL、Taq DNA聚合酶0.2μL、循环次数32次。3组样本验证效果满意。 优化的CYP2C19*2、*3和*17基因PCR反应体系稳定性高，重复性和经济性较好，为该基因多态性的大规模调查奠定了基础。 关键词 正交设计, CYP2C19, PCR体系, 体系优化, 基因多态性, SNaPshot |
