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| 金柑MLP2-2蛋白制备及蛋白酶抑制功能验证 摘要：MLP2-2基因是存在于金柑中的一种蛋白酶抑制剂基因。前期研究发现，该蛋白酶抑制剂可以抑制植物细胞溶酶体内蛋白酶，保护植物蛋白在遭受冻害后恢复。本实验通过对两年生金柑幼苗冷驯化，促使金柑体内MLP2-2基因转录表达，提取叶片RNA反转录获得cds序列，构建pBRT7-MLP2-2过表达载体，转入Rosetta（DE3）大肠杆菌工程菌，提取蛋白进行蛋白功能分析。提取正常型金柑叶片总蛋白，加入蛋白酶抑制剂，分时段检测蛋白质浓度，验证蛋白酶抑制剂功能。实验结果发现，在蛋白酶抑制剂添加组，初期蛋白降解速度较快，随后降解速率缓慢下降。正常提取液组，初期蛋白降解速度较慢，随后快速降解。 |
