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| 重组酮还原酶在大肠杆菌中的优化表达 摘要：本研究通过测定重组大肠杆菌的培养中改变IPTG的诱导温度、诱导时机、诱导时间以及诱导剂浓度，来测定不同条件下重组大肠杆菌的表达效果。以阿扎那韦为底物，还原型辅酶I(NADH)为辅酶，应用紫外-可见光分光光度计法测定发酵液中酮基还原酶活性，通过连续测定NADH消耗量来计算酶活力，反应体系：NADH浓度为0.2 mmol/L，阿扎那韦浓度为1.0 mmol/L，磷酸缓冲溶液浓度为100 mmol/L、pH值为6，反应温度为40 ℃[1]。此方法操作简便，耗时短，精确度高，重复性好，能够准确得出重组酮还原酶在大肠杆菌中的最优表达。 关键字：大肠杆菌； IPTG； 酮还原酶； 目录 第1章 文献 综述 4 1.1 酮还原酶 4 1.2 酮还原酶的发现 4 1.2.1 酮还原酶的数据挖掘 4 1.3 酶的来源和分类 5 1.4 醛酮还原酶研究现状 5 1.4.1 醛酮还原酶的命名 5 1.4.2 醛酮还原酶在肺癌中的应用 5 1.4.3 醛酮还原酶在肝癌中的应用 5 1.5 手性化合物 6 1.5.1 酮还原酶在手性醇合成中的应用 6 1.6 辅酶再生 7 1.7 IPTG的原理 7 1.8 阿扎那韦 8 第2章 实验部分 8 2.1 材料与仪器 8 2.1.1 实验材料 8 2.2 试验方法 9 2.3 重组大肠杆菌的培养 9 2.3.1 固体培养基的制备： 9 2.3.2 大肠杆菌与培养 9 2.3.3 粗酶的制备 10 2.3.4 酶活的测定 10 2.4 实验方法及结果 10 2.4.1 NADH（分子量：763.4）标准曲线的绘制 10 2.4.2 粗酶液的制备 11 2.4.3 诱导温度对重组酶表达的影响 12 2.4.4 诱导时机对重组酶表达的影响 12 2.4.5 诱导剂浓度对重组酶表达的影响 13 2.4.6 诱导时间对重组酶表达的影响 14 2.5 本章小结 14 参考文献 |
