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| 爵床科六种植物的DNA条形码鉴定 摘要： 爵床科（Acanthaceae）属于管状花目（Tubiflorae）中的一个大科，属、种多，分布范围广，生活型独特，营养和繁殖器官差异大且有丰富的多样性[1]。本论文选用了爵床科6种植物（其中有同一种植物采自两个不同的地域）共19个样品作为实验的研究材料，通过采用DNA条形码技术对其进行区分和鉴定。本次毕业设计实验总共扩增了3条DNA条形码的候选序列，分别为核基因psbA-trnH序列、ITS2序列和rbcL序列。 本次毕业设计实验提取了6种植物共21个样品的DNA，并且成功取得了3条所选序列的PCR扩增产物共计45个扩增序列。其中，菜头肾（Championella sarcorrhiza）的1个样品、白接骨的1个样品、圆苞金足草的2个样品的psbA-trnH序列未扩增成功，黄猄草（Championella tetrasperma）的3个样品、菜头肾的1个样品、白接骨（Asystasiella neesiana）的3个样品、圆苞金足草（Goldfussia pentstemonoides）的2个样品的ITS2序列未扩增成功，九头狮子草的1个样品、菜头肾的2个样品、圆苞金足草的1个样品的rbcL序列未扩增成功。不同的引物由于其序列不同，因此其PCR扩增效率会出现差异：最高的是psbA-trnH和rcbL的扩增效率都为80.95%，其次是ITS2的扩增效率为52.38%。通过测序结果可以知道，除了ITS2序列的测序效率比较低外，psbA-trnH序列和rbcL序列的成功率较高，基本上可以获得较为完整的碱基序列。 本实验通过DNA条形码技术原理对爵床科植物进行实验操作，采用生物统计软件MEGA6.0对获得的碱基序列进行数据分析以及构建系统发育树。结果表明，以rbcL序列为主，psbA-trnH序列为辅构建的体系对爵床科植物的快速鉴定效果最佳。 关键词：爵床科；系统发育树；DNA条形码鉴定 目 次 摘要………………………………………………………………………………………..Ⅰ 目次……………………………………………………………………………….……….Ⅲ 1前言………………………………………………………………………………………1 1.1爵床科植物的简介和研究概况………………………………………………………1 1.1.1爵床科植物简介……………………………………………………………………1 1.1.2爵床科生物的研究概况……………………………………………………………1 1.2爵床科植物的鉴别现状………………………………………………………………1 1.3DNA条形码鉴定技术…………………………………………………………………..2 1.3.1 DNA条形码技术介绍………………………………………………………………2 1.3.2 DNA条形码技术原理………………………………………………………………2 1.3.3 DNA条形码技术与其他鉴定方法的对比…………………………………………3 1.3.3.1其他分子生物学鉴定方法简介…………………………………………………3 1.3.3.2 DNA条形码技术的优缺点………………………………………………………4 2爵床科六种植物DNA条形码鉴定体系的构建…………………………………………4 2.1实验材料与仪器………………………………………………………………………4 2.1.1实验材料……………………………………………………………………………4 2.1.2实验仪器……………………………………………………………………………5 2.2实验方法………………………………………………………………………………5 2.2.1爵床科植物的DNA提取……………………………………………………………6 2.2.2 DNA浓度及A260/A280的测定………………………………………………………..6 2.2.3 PCR扩增反应………………………………………………………………………6 2.2.4琼脂糖凝胶电泳……………………………………………………………………7 2.2.5测序…………………………………………………………………………………7 2.2.6数据分析……………………………………………………………………………7 3结果与分析………………………………………………………………………………7 3.1电泳结果分析…………………………………………………………………………7 3.2系统发育树分析……………………………………………………………………..10 3.3种间遗传距离的分歧分析…………………………………………………………..11 4讨论……………………………………………………………………………………..13 参考文献………………………………………………………………………………….14 |
