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| Rab9a Ser 71磷酸化模拟突变体的构建和功能初探
目录
1 前言 4
2材料与方法 5
2.1 材料 6
2.1.1 实验菌株、细胞和质粒 6
2.1.2本实验所使用的引物 6
2.1.2 抗体 7
2.1.3 主要试剂 7
2.1.4 常用溶液组分 8
2.1.5 主要仪器设备 8
2.2 实验方法 9
2.2.1 PCR法扩增目的片段 9
2.2.2胶回收 9
2.2.3 EcoRI/SaII双酶切 10
2.2.4 酶切产物回收 10
2.2.5酶切产物与质粒DNA的连接及转化 10
2.2.6阳性克隆的初筛（质粒提取） 11
2.2.7 阳性克隆的复筛（PCR鉴定) 11
2.2.8 DNA序列的测定与比对 12
2.2.9 western blot（免疫印迹） 12
2.2.10 细胞转染 13
2.2.11共聚焦显微镜观察Rab9a的定位变化 13
3 实验结果与分析 14
4 讨论 20
参考文献 21
致谢 22
附录 23
pEGFP-Rab9a S71A的测序结果 23
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