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| 载基因的靶向阳离子光声超声分子探针对视网膜母细胞瘤皮下移植瘤的诊断和治疗的研究 摘要 目的 构建叶酸修饰的，阳离子的，包裹液态氟碳 (PFP)及吲哚菁绿 (ICG) 的脂质纳米粒 (FA/CN/PFP/ICG, FCNPI)，检测其基本性质，相变特性，基因携载能力，靶向性以及生物相容性等。 方法 本部分研究共有两节。第一节采用双乳化法制备脂质纳米粒，通过在成膜材料中使用叶酸修饰的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇 (DSPE-PEG2000-Folate)，及加入DC-胆固醇 (DC-cholesterol)使纳米粒表面带有叶酸并带正电荷，从而构建靶向阳离子纳米粒FCNPI，对其形态结构，粒径，电位，ICG包封率等基本性质进行检测；体外使用808nm 激光仪激发，观察FCNPI发生相变的情况；并检测其携载质粒的能力，细胞毒性和稳定性。第二节是通过细胞实验和动物实验验证FCNPI的靶向性能。上述实验均同时制备非靶向中性纳米粒 (NN/PFP/ICG，NNPI)和非靶向阳离子脂质纳米粒 (CN/PFP/ICG，CNPI) 与之进行比较。 结果 本法制备的FCNPI脂质纳米粒为绿色乳液，在扫描电镜下观察发现， 其形态为大小均匀的球形，且分散度较好。FCNPI粒径为 (328.4±5.5)nm，表面电位为 (35.3±1.9) mV。紫外分光光度计的方法测得FCNPI内ICG的包封率为92.1±1.3%。当采用激光辐照 (808nm，1W/cm2，2min) 后，可见FCNPI纳米粒发生气液相变产生了微泡。基因携载实验结果显示当加入40μg质粒时，靶向阳离子组 (FCNPI)，非靶向阳离子组 (CNPI) 和非靶向中性组 (NNPI) 携载TK-GFP的能力分别是22.4±0.1μg，22.7±0.1μg和16.76±1.75μg (per 5×108 nanoparticles)，FCNPI和CNPI的基因携载量无统计学差异 (P＞0.05)。细胞毒性实验表明NNPI、CNPI 、FCNPI携载质粒前后细胞活性均在85%以上，且在48h内稳定性良好。在激光共聚焦显微镜下观察发现，在靶向阳离子组 (FCNPI)，带有绿色荧光的细胞周围附着了许多具有红色荧光的纳米粒，其次是非靶向阳离子组 (CNPI)，而非靶向中性组 (NNPI) 和拮抗组均未见到明显的纳米粒与细胞结合的趋势。活体荧光检测显示靶向阳离子组 (FCNPI) 瘤块区域显示最多的荧光，在注射2小时后达到高峰，24小时逐渐消散，非靶向阳离子组 (CNPI) 仅少许红色荧光，非靶向中性组 (NNPI) 在观察时间内均未见到红色荧光。24小时后取出瘤块再检测荧光，靶向阳离子组 (FCNPI) 荧光最强，其次是非靶向阳离子组 (CNPI)，非靶向中性组 (NNPI) 最弱。 结论 成功制备出形态较规则，大小较均匀，性质较稳定的，分散性较好，生物安全性好的靶向阳离子相变型脂质纳米粒FCNPI。该造影剂相变能力，靶向能力较好，能够运用到下一步实验中。 关键词：叶酸靶向，光致相变 ，阳离子脂质纳米粒，基因携载 |
