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超声分子探针对视网膜母细胞瘤皮下移植瘤的诊断和治疗的研究

更新时间:2019-09-12
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超声分子探针对视网膜母细胞瘤皮下移植瘤的诊断和治疗的研究

摘要


目的  构建叶酸修饰的靶向阳离子的液态氟碳 (PFP)及吲哚菁绿 (ICG) 脂质纳米粒 (FA/CN/PFP/ICG, FCNPI),检测其基本性质,相变特性,基因携载能力,细胞毒性及体内外靶向性等。
方法  本部分研究分为两节进行。第一节采用双乳化法制备脂质纳米粒,通过在成膜材料中使用叶酸修饰的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇 (DSPE-PEG2000-Folate),及加入DC-胆固醇 (DC-cholesterol)使纳米粒表面带有叶酸并带正电荷,从而构建靶向阳离子纳米粒FCNPI,对其形态结构,粒径,电位,ICG包封率等基本性质进行检测;体外使用808nm 激光仪激发,观察FCNPI发生相变的情况;并检测其携载质粒的能力,细胞毒性和稳定性。第二节是通过细胞实验和动物实验验证FCNPI的靶向性能。上述实验均同时制备非靶向中性纳米粒 (NN/PFP/ICG,NNPI)和非靶向阳离子脂质纳米粒 (CN/PFP/ICG,CNPI) 与之进行比较。
结果  本法制备的FCNPI脂质纳米粒呈绿色乳液,光镜及扫描电镜观察到形态呈球形,分散度较好,大小较均匀。激光共聚焦显微镜下经DiI染色后显红色荧光,连接经FITC标记的二抗后显绿色荧光,流式细胞学检测显示其叶酸的连接率高达98.82%。FCNPI粒径为 (328.4±5.5)nm,表面电位为 (35.3±1.9) mV。紫外分光光度计的方法测得FCNPI内ICG的包封率为92.1±1.3%。当采用激光辐照 (808nm,1W/cm2,2min) 后,可见FCNPI纳米粒发生气液相变产生了微泡。基因携载实验结果显示当加入40μg质粒时,靶向阳离子组 (FCNPI),非靶向阳离子组 (CNPI) 和非靶向中性组 (NNPI) 携载TK-GFP的能力分别是22.4±0.1μg,22.7±0.1μg和16.76±1.75μg (per 5×108 nanoparticles),FCNPI和CNPI的基因携载量无统计学差异 (P>0.05)。细胞毒性实验表明NNPI、CNPI 、FCNPI携载质粒前后细胞活性均在85%以上,且在48h内稳定性良好。激光共聚焦显微镜观察,靶向阳离子组 (FCNPI) 可见到大量红色荧光纳米粒粘附于绿色荧光的细胞,其次是非靶向阳离子组 (CNPI),而非靶向中性组 (NNPI) 和拮抗组均未见到明显的纳米粒与细胞结合的趋势。活体荧光检测显示靶向阳离子组 (FCNPI) 瘤块区域显示最多的荧光,在注射2小时后达到高峰,24小时逐渐消散,非靶向阳离子组 (CNPI) 仅少许红色荧光,非靶向中性组 (NNPI) 在观察时间内均未见到红色荧光。24小时后取出瘤块再检测荧光,靶向阳离子组 (FCNPI) 荧光最强,其次是非靶向阳离子组 (CNPI),非靶向中性组 (NNPI) 最弱。
结论  成功制备出形态较规则,分散性较好,大小较均匀,性质较稳定的,生物安全性好的靶向阳离子相变型脂质纳米粒FCNPI。该造影剂具有良好的相变能力,靶向能力,为下一步实验奠定了基础。
关键词:叶酸靶向,阳离子脂质纳米粒,光致相变 ,基因携载


目  录

符号说明 1
中文摘要 2
英文摘要 3
论文正文:载基因的靶向阳离子光声/超声分子探针对视网膜母细胞瘤皮下移植瘤的诊断和治疗的研究 4
前  言 5
第一部分  靶向阳离子纳米分子探针的制备及性能检测 7
第一节  靶向阳离子纳米分子探针的制备及理化性质检测 10
1  材料与方法 11
2  结果 11
3  讨论 12
参考文献 13
附图 14
第二节  靶向阳离子纳米分子探针的靶向性检测 10
1  材料与方法 11
2  结果 11
3  讨论 12
参考文献 13
附图 14
第二部分  靶向阳离子纳米分子探针体内外光声/超声显像的实验研究 7
第一节  靶向阳离子纳米分子探针体外双模态显像的实验研究 10
1  材料与方法 11
2  结果 11
3  讨论 12
参考文献 13
附图 14
第二节  靶向阳离子纳米分子探针体内双模态显像的实验研究 10
1  材料与方法 11
2  结果 11
3  讨论 12
参考文献 13
附图 14
第三部分  激光辐照靶向载基因的阳离子纳米分子探针,体内外基因转染治疗RB的实验研究 7
第一节  激光辐照靶向载基因的阳离子纳米分子探针,体外基因转染治疗RB的实验研究 10
1  材料与方法 11
2  结果 11
3  讨论 12
参考文献 13
附图 14
第二节  激光辐照靶向载基因的阳离子纳米分子探针,体内基因转染治疗RB的实验研究 10
1  材料与方法 11
2  结果 11
3  讨论 12
参考文献 13
附图 14
文献综述 60
致  谢 89